高中生物实验之细胞培养一般方法

　　应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-37.5度，取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.

　　在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养.

　　贴壁细胞:

　　对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱.50ml培养瓶加入消化液约0.6ml，按此比例进行消化，(根据配制强度经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验.

　　悬浮细胞:

　　一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心500rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养.

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　　生物姐

　　专业知识薄弱，经典方法、模式思维没有形成等因素，致使一个实验从探究、设计、操作到最后的结果分析往往是问题百出。为了考试答题规范，理清思路，形成模式，以便更好地用实验解决生物中的相关问题，生物姐在从教学过程中对生物实验设计中的一些方面给予总结，仅供参考：(马上点标题下“高中生物”关注可获得更多知识干货，每天更新哟！)

　　淀粉：碘液(蓝色)。

　　还原性糖：斐林试剂班氏试剂(沸水浴后生成砖红色沉淀)。

　　CO2：Ca(OH)2溶液(澄清石灰水变浑浊)。

　　O2：余烬复然；无O2：火焰熄灭。

　　蛋白质：被蛋白酶水解、双缩脲试剂(紫红色)。

　　脂肪：苏丹Ⅲ染液(橘黄色)、苏丹Ⅳ染液(红色)。

　　DNA：二苯胺(沸水浴，蓝色)或甲基绿(染色后，呈绿色)，也可用DNA酶。

　　实验条件的控制方法

　　隔绝气体：密封玻璃容器可用石蜡，隔绝空气与液体可用油膜；排气或充气可依据升温或冷却。

　　增加水中氧气：泵入空气或吹气或放入绿色植物；减少水中氧气：容器密封或油膜覆盖或用凉开水。

　　除去容器中CO2：NaOH溶液；增加容器中的CO2：NaHCO3溶液。

　　除去叶中叶绿素：酒精水浴加热。

　　析出或溶解物质：水溶性根据溶解度，脂溶性可用丙酮或酒精。

　　除去植物光合作用对呼吸作用的干扰：给植株遮光；

　　如何得到单色光：棱镜色散或透明薄膜滤光。

　　酶促反应：水浴保温。

　　用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热。

　　细胞和组织培养以及微生物培养：恒温箱培养。

　　降温，冷却；升温，加热。

　　维持PH：缓冲溶液(HCO3-/H2CO3，HPO43-/H2PO42-)；降低加酸或生理酸性盐，升高加碱或生理碱性盐。

　　线粒体提取：细胞匀浆离心。

　　动物细胞的处理：破裂用清水，细胞的失水用NaCl。注意搅拌。

　　骨无机盐的除去：盐酸溶液。

　　灭菌方法：培养基用高压蒸汽灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂冼净，擦干后用75%酒精消毒；实验室或接种箱用甲醛蒸汽或紫外灯灭菌；整个过程都在实验室无菌区或酒精灯旁进行。

　　消除叶片中脱落酸的影响：去除成熟的叶片；

　　消除植株本身的生长素：去掉生长旺盛的器官或组织(芽、生长点)；

　　补充植物激素的方法：涂抹、喷洒、用含植物激素的羊毛脂膏或琼脂作载体；

　　看看网友们都有什么想法

　　网友1

　　上面的方法已经是最常用的方法了，现象明显，操作简单。其他的像通过紫色石蕊试液变红只能说明有酸的存在，二氧化碳存在的现象还是不明显

　　网友2

　　利用核移植技术证明高度分化的动物细胞核仍具有全能性

　　第三部：将雄性青蛙的体细胞(供核)与去核的卵母细胞融合形成重组细胞

　　个体

　　结果：正常雄性青蛙的体细胞直接进行培养没办法得到一个完整的个体，利用核移植技术得到的重组细胞经过培养可以得到一个完整的个体

　　结论：高度分化的动物细胞细胞核仍具有全能性